Лабораторная диагностика болезней рыб. Правила взятия и пересылки больных рыб и патологического материала для лабораторных исследований

Больных или подозрительных по заболеванию рыб доставляют в ветеринарную лабораторию живыми. Для исследования берут 10-15 рыб (старшего возраста -5) на различных стадиях болезни с явно выраженными клиническими признаками.

Рыб перевозят в молочных бидонах или других емкостях, заполненных на ³/₄ объема водой из того же водоема, откуда взята проба, или водой из артезианской скважины.

Летом при длительной транспортировке воду с рыбой постепенно охлаждают до температуры 12-15°С, добавляя мелкие кусочки льда. Чтобы не вызвать у рыб температурного шока, нельзя допускать перепад температуры воды исходного водоема и транспортной емкости более 5-7°С.

Если доставить в лабораторию живую рыбу невозможно, для бактериологического исследования берут кусочки органов и тканей рыб, помещают их в стерильную стеклянную посуду с 40 %-ным водным раствором глицерина, закрывают пробкой, заливают парафином и направляют с нарочным.

Кровь, экссудат и другой жидкий патологический материал доставляют в стерильных запаянных пастеровских пипетках. Для микроскопического исследования эти же материалы посылают в лабораторию в виде мазков и препаратов-отпечатков (кляч-препаратов).

Для обнаружения бактерий исследуют выделения, органы и ткани рыб, а также кровь, экссудат, содержимое абсцессов, опухолей, инфильтратов, выделения из язв, паренхиматозные органы, содержимое кишечника, слизь с жабр и поверхности тела.

Летом бактериологические исследования патологического материала проводят не позднее чем через 2 ч после взятия. В исключительных случаях в лаборатории рыбоводного хозяйства делают бактериологические посевы на мясо-пептонный бульон и мясо-пептонный агар.

Для вирусологического исследования берут кусочки пораженных органов и тканей массой не более 3-5 г, замораживают или консервируют в 50 %-ном растворе химически чистого глицерина (рН 7,2-7,4) в соотношении 1:5-1:10, помещают в стерильные флаконы, закрывают пробкой и заливают парафином.

Материал для гистологических исследований берут от погибших и вынужденно убитых рыб. Мелких рыб (мальки и сеголетки) после вскрытия брюшной полости фиксируют целиком, а от крупных берут органы или кусочки органов размером 2x3 см и толщиной 0,5-1,0 см. Кусочки из пораженных органов и тканей вырезают так, чтобы были захвачены нормальные и измененные участки. Независимо от степени поражения берут кусочки кожи с подлежащей мускулатурой, жабр, печени, почек, селезенки; сердца, кишечника, плавательного пузыря, головного мозга. Кишечник перед фиксацией осторожно вскрывают или делают на нем несколько надрезов, чтобы фиксирующая жидкость проникла в его полость. Головной мозг осторожно извлекают после вскрытия черепной коробки. Подлежащий исследованию материал помещают в широкогорлую стеклянную банку и фиксируют 10%-ным формалином в объеме, в 10 раз превышающем объем взятого материала.

Для гистохимических исследований патологического материала в качестве фиксатора используют жидкость Карнуа (спирт абсолютный - 60 мл, хлороформ - 30 мл и ледяная уксусная кислота - 10 мл) или жидкость Буэна (насыщенный раствор пикриновой кислоты - 75 мл, концентрированный формалин - 25 мл, ледяная уксусная кислота - 5 мл). Так как выбор фиксатора зависит от цели дальнейшей обработки материала, на этикетке указывают фиксирующий раствор.

Кровь для исследования берут из сердца или из хвостовой артерии. Чешую на месте взятия крови снимают скальпелем, вытирают слизь, кожу дезинфицируют 70 %-ным спиртом. Кровь набирают в пастеровскую пипетку, переносят на часовое стекло и быстро берут необходимое количество для гематологических исследований. Мазки крови для исследования на кровепаразитов, выведения лейкоцитарной формулы готовят обычным способом, высушивают, нумеруют, завертывают каждый в чистую бумагу и направляют в лабораторию.

Для биохимических исследований берут цельную кровь в пробирки, добавляют к ней лимоннокислый или щавелевокислый натрий (на 1 мл 2 мг), раствор гепарина (1000 ЕД/мл), наклеивают этикетку и направляют в ветеринарную лабораторию.

Сыворотку крови для биохимических и серологических исследований получают следующим образом. Кровь собирают в небольшие пробирки и оставляют при комнатной температуре для свертывания. Отделившуюся от кровяного сгустка сыворотку отсасывают стерильной пастеровской пипеткой и отправляют в лабораторию в запаянных ампулах. Сыворотку, предназначенную для серологических исследований, консервируют 2%-ной борной кислотой или 0,05 %-ным фенолом (1-2 капли 5 %-ного фенола на 1 мл сыворотки), или тиомерсалом 1:10 000. Цельную кровь и сыворотку транспортируют в термосе со льдом. Материал должен быть доставлен в течение суток после взятия.

У крупных рыб извлекают пораженные паразитами органы (жабры, кишечник, печень и другие ткани) и помещают в банки с консервирующей жидкостью (70 %-ный этиловый спирт или 4 %-ный раствор формалина). Паразитических организмов, а также кусочки органов и тканей, где обнаружены паразиты, помещают в пробирки или флаконы с консервирующей жидкостью. При подозрении на протозойные болезни из исследуемого материала делают мазок и сразу опускают его на 15-20 мин в жидкость Шаудина (50 мл насыщенного раствора сулемы и 25 мл абсолютного спирта). Маленькие кусочки тканей и органов, пораженных паразитическими простейшими, фиксируют в указанной смеси 30-120 мин. Затем стекла промывают водой и спиртами возрастающей крепости (50-60-70 %) и сохраняют в 70 %-ном спирте до исследования. Влажные мазки, кусочки органов и тканей с паразитами можно фиксировать также в жидкости Буэна. Фиксация мазков 1-20 мин, кусочков- 1-12 ч.

Перед консервированием гельминтов тщательно промывают в физиологическом растворе и выдерживают в нем до гибели паразитов.

Моногенетических сосальщиков (дактилогирусы, гиродактилюсы и др.) консервируют в 4 %-ном растворе формалина или глицерин-желатине (под покровным стеклом). Трематод и мелких цестод кладут на предметные стекла, накрывают покровным стеклом и помещают на несколько часов в бактериологическую чашку с 70 %-ным спиртом. Затем при помощи кисточки гельминтов перекладывают в пробирку с 70 %-ным спиртом.

Нематод и личиночные стадии цестод консервируют в жидкости Барбагалло (3 %-ный раствор формалина на изотоническом растворе поваренной соли: 30 мл формалина, 9 г поваренной соли, 1000 мл дистиллированной воды). Для изготовления постоянных препаратов в канадском бальзаме живых нематод лучше консервировать в 70 %-ном горячем спирте.

Крупных ленточных гельминтов после умерщвления в физиологическом растворе помещают в 70 %-ный спирт.

При консервировании скребней в 70 %-ном спирте осторожно выдавливают хоботок из влагалища путем слабого прессования переднего конца скребней под покровным стеклом.

Паразитических рачков консервируют в 3 %-ном растворе формалина и сразу же переносят для хранения в 70 %-ный спирт.

Пиявок фиксируют в 4 %-ном растворе формалина. При этом у них сохраняется пигментация, что облегчает диагностику вида.

Патологический материал, предназначенный для бактериологического, паразитологического и других исследований, снабжают этикеткой, где указывают вид и возраст рыбы, название органа, из которого взят материал. Если в одну посуду помещают несколько объектов исследования, этикетку прикрепляют к каждой рыбе (мальку, сеголетку) или органу или отдельные кусочки органа завязывают вместе с этикеткой в марлю. Этикетки надписывают простым карандашом и опускают в посуду с материалом таким образом, чтобы можно было легко прочесть надпись.

Планктон собирают в водоеме планктонной сеткой, исследуют его в живом виде или консервируют в жидкости Барбагалло. Грунт для исследования берут со дна водоема дночерпателем в количестве 2 кг.