Отбор маточных растений
Отбираются крупные здоровые растения со зрелыми спороносными пятнами. Спороносное пятно в зрелом состоянии имеет темно-коричневую окраску в проходящем и отраженном свете и заметно выступает над поверхностью пластины. Верхняя часть зрелого пятна может иметь более светлый оттенок в связи с начавшимся выходом спор. Маточные растения необходимо предохранять от воздействия прямых солнечных лучей, от атмосферных осадков и обсыхания, под влиянием которых споры могут быстро потерять жизнеспособность.
Стимулирование выхода зооспор заключается в выдерживании спороносных растений на воздухе. Стимулирование маточных растений проводят на вешалах в прохладном помещении, с оптимальной температурой 100С, допустима температура в пределах 5—15°С, с хорошей естественной или принудительной вентиляцией. Отобранные маточные растения или их части со спороносными пятнами промывают отфильтрованной морской водой и развешивают на вешалах так, чтобы растения не соприкасались. Продолжительность стимулирования зависит от температуры, влажности, подвижности воздуха в помещении и в каждом конкретном случае подбирается определенный режим в результате контроля за динамикой выхода спор. В большинстве случаев хороший выход спор начинается не ранее, чем через 12 часов после начала стимулирования. Длительность стимулирования можно в значительной мере увеличить (до 3—4 суток), если пластины ламинарии после исчезновения капельной влаги скрутить в трубку, проложив бумагой и поместить в холодное помещение при температуре, близкой к 00С.
Техника контроля за выходом спор заключается в следующем. На спороносное пятно у 3—5 растений пипеткой наносится несколько капель морской воды. Спустя 15 мин капли собираются и переносятся на предметное стекло и просматриваются под микроскопом. Обычно контроль ведется при увеличении в 120 раз. Выход спор считается нормальным, если в поле зрения в большинстве капель находится более 100 спор.
Перед проведением посева полезно осуществить контрольное стимулирование ламинарии для определения режима стимулирования и расчета необходимого количества маточных растений. Расчет проводится таким образом. После стимулирования части растений с определенной площадью спороносного пятна помещают в отдельные емкости и заливают морской водой. Через час кусочки вынимают из емкости, а суспезию доводят до определенного объема. С помощью камеры Горяева определяют количество спор в единице объема, подсчитывается среднее количество спор, которое можно получить от одного растения. На основе опыта культивирования известно, что нормальным является посев, когда на 1 мм2 верхней поверхности контрольного стекла насчитывается 50—100 спор (контролем служит предметное стекло, закладываемое вместе с субстратами в посевную емкость). Если предположить, что споры оседают на веревочный субстрат так же, как на стекло, можно определить полезную площадь субстрата, которая равна диаметру субстрата, умноженную на его длину. При длине субстратов, использовавшихся при культивировании ламинарии, равно 5.5 м и диаметре 5 мм, полезная площадь поверхности составит 2.75х104 мм2 и на ней должно находиться 1.4—2.8 млн спор.
Определив, сколько зооспор дает одно растений, можно рассчитать, какое количество растений необходимо для проведения посева на определенное число субстратов. Исследования показывают, что зрелое слоевище ламинарии сахаристой при правильно проведенном стимулировании может давать около 130 тыс. спор с 1 мм2 спороносного пятна. Средняя площадь спороносного пятна составляет 50—60 тыс. мм2. Следовательно, одно растений дает около 65х108—78х108 спор, что достаточно для посев засева 2300—2500 субстратов длиной 5.5 м. Однако добиться столь высокого выхода спор не всегда удается. Кроме того, часть спор оседает на дне и стенках емкости, в которой производится посев, часть спор не закрепляется на субстрате, поэтому приходится увеличивать количество маточных растений по отношению к теоретически рассчитанной величине в 10—20 раз.