Переводчик сайта

Поиск по сайту

Паразитологическое исследование

 

Для паразитологического исследования используют живых или только что уснувших рыб всех возрастных категорий. Берут следующее количество рыб: мальков - 25 экз., сеголетков-15-25 экз., годовиков-10-15 экз., остальных возрастных групп по 3-5 экз.

 

Исследование проводят в следующем порядке: кожа, плавники, ротовая полость, жабры, глаза, кровь, сердце, брюшная полость (печень, селезенка, плавательный пузырь, мочевой пузырь, желчный пузырь, почки, половые железы, кишечник), мышцы, головной и спинной мозг.

 

Результаты исследований вносят в рабочий журнал, где указывают дату, место вылова рыбы, пол, возраст, массу и длину рыбы, данные паразитологического исследования с предварительным и окончательным определением паразитов.

 

Для обнаружения трипанозом и криптобий у рыбы берут кровь из сердца и делают мазки.

 

Для предотвращения свертывания крови добавляют 1 %-ный раствор лимоннокислого натрия, накрывают покровным стеклом и микроскопируют. Чтобы мазок не высыхал, края покровного стекла смазывают вазелином. Одновременно несколько мазков крови высушивают на воздухе, фиксируют в метиловом спирте, окрашивают по Романовскому - Гимзе или гематоксилином и микроскопируют.

 

 

Кожный покров. При наружном осмотре кожного покрова и плавников собирают всех паразитов, видимых простым глазом: паразитических ракообразных, пиявок, нематод и других (их предварительно определяют и фиксируют для последующего изучения). Затем скальпелем снимают слизь со всей поверхности тела (мальки, сеголетки, годовики) или с нескольких участков (крупные рыбы) и с плавников, микроскопируют, помещают ее на предметное стекло и смешивают с 2-3 каплями прокипяченной и остуженной воды. Накрывают покровным стеклом и просматривают сначала под лупой, а затем под малым увеличением микроскопа. Возбудителя костиоза можно обнаружить только при среднем увеличении микроскопа. Кроме возбудителей костиоза, на коже рыб паразитируют другие жгутиконосцы, инфузории, моногенетические сосальщики и др. Обнаруживают также споровиков, локализирующихся в дермальных бугорках. Под кожей, в подчешуйных кармашках и в лучах хвостового и спинного плавников иногда находят нематод.

 

Крупных паразитов (рачков, гельминтов) подсчитывают в абсолютных числах, а мелких (споровиков, инфузорий и других простейших) - в относительных, то есть учитывают число паразитов в десяти полях зрения микроскопа и определяют средние показатели. При этом высчитывают экстенсивность и интенсивность заражения каждым паразитом в отдельности для рыб каждого вида и возраста.

 

При осмотре кожного покрова можно видеть пигментированные пятна (черного цвета). В этих местах в толще кожи локализуются метацеркарии Posthodiplostomum cuticula. На плавниках встречаются цисты сосальщика Bucephalus.

 

После кожного покрова обследуют жаберный аппарат. Жаберные дужки помещают на предметное стекло, всех паразитов, видимых простым глазом, подсчитывают и фиксируют. С жаберных лепестков делают соскоб или берут жаберные дужки и с несколькими каплями воды зажимают между двумя предметными стеклами до прозрачности и исследуют под малым увеличением микроскопа.

 

Споровики, некоторые инфузории и личинки сосальщиков могут быть и в соединительных образованиях (бугорках); обнаружить и извлечь их можно только после разрыва стенки бугорка с помощью препаровальной иглы. В кровеносных сосудах жабр встречаются яйца сангвиникол, споры и мицелий гриба.

 

Глаза. Для обнаружения паразитов (личинок сосальщиков) глаза извлекают из глазных впадин, кладут на предметное стекло и вскрывают острыми ножницами с внутренней стороны. Стекловидное тело, хрусталик и содержимое передней камеры глаза помещают между двумя предметными стеклами и просматривают под малым увеличением микроскопа.

 

Брюшная полость. Вскрывают брюшную полость по методике, описанной в разделе "Бактериологическое исследование", с той только разницей, что при паразитологическом исследовании нет необходимости соблюдать условия стерильности. Дугообразный разрез к основанию левого грудного плавника ведут от анального отверстия, вводят непосредственно в него тупой конец одной из бранш ножниц. Вскрытую брюшную полость осматривают, крупных паразитов (лигуна и др.) извлекают, а имеющиеся на серозных покровах и брыжейке бугорки микроскопируют.

 

Сердце вынимают вместе с крупными сосудами, помещают бактериологическую чашку с физилогическим раствором, вскрывают его полости, промывают образовавшийся осадок и микроскопируют на наличие возбудителя сангвиниколеза и некоторых метацеркариев.

 

Печень. При наружном осмотре печени можно обнаружить на ее поверхности личинок круглых червей и белые бугорки с заключенными в них личинками ленточных червей. Чтобы обнаружить паразитов, обитающих внутри печени, ее делят на небольшие кусочки, компрессируют и исследуют под лупой, а затем под малым увеличением микроскопа. Желчный пузырь вырезают, помещают на предметное стекло, разрезают ножницами, делают соскоб с внутренней оболочки стенки пузыря. Соскоб и сам желчный пузырь помещают между двумя предметными стеклами и исследуют под лупой или микроскоп. В желчном пузыре можно обнаружить простейших сосальщиков и личинок ленточных червей.

 

Селезенку исследуют так же, как печень.

 

Почки. Для обнаружения паразитов кусочки органа помещают между стеклами и исследуют под микроскопом. В почках можно найти крупных паразитов, споровики, яйца сосальщиков, занесенных током крови.

 

Плавательный пузырь. Наружную волокнистую оболочку плавательного пузыря снимают. Паразиты, находящиеся в его стенке и полостях. Обычно хорошо видны. Их извлекают и исследуют. Иногда берут соскоб с внутренней оболочки пузыря больной рыбы и тщательно микроскопируют.

 

Мочевой пузырь. Методика исследования сходна с исследованием желчного пузыря. В мочевом пузыре обнаруживают сосальщиков, споровиков и инфузорий.

 

Половые железы. Для обнаружения паразитов железу частями компрессируют между двумя стеклами и просматривают под микроскопом. В половых железах встречаются микроспородии и крупные плероцеркоиды, окруженные фиброматозными сумками.

 

Желудочно - кишечный тракт. Пищевод, желудок и кишечник извлекают, освобождают от жира, расправляют и вскрывают, начиная с пищевода. Обнаруженных крупных паразитов (ленточных и круглых червей, сосальщиков) помещают в физиологический раствор. Содержимое из разных отделов желудочно - кишечного тракта исследуют компрессорным методом под микроскопом. Затем с помощью скальпеля делают глубокий соскоб со слизистой оболочки из нескольких мест и исследуют на наличие микроскопических паразитов.

 

Мысшцы. Для обнаружения зараженности рыб плероцеркоидами, лентецами и другими крупными паразитами мысшцы разрезают на пластинки толщиной 5 мм и просматривают. Чтобы найти мелких паразитов, берут небольшие кусочки мышц из различных частей тела и исследуют компрессорным методом под лупой и под малым увеличением микроскопа.

 

Головной и спинной мозг исследуют компрессорным методом. В этих органах можно обнаружить споровиков Myxosoma cerebralis Tetrocotyle variegateu.

 

Хрящи. Для обнаружения возбуителя миксозомоза (вертежа лососевых) компрессорным методом исследуют черепные и межпозвоночные хрящи.

 

Мазки крови окрашивают азур-эозином по Романовскому - Гимзе. Готовую краску Романовского перед окрашиванием разводят нейтральной дистиллированной водой из расчета 2 - 3 капли краски на 1 мл воды.

 

Растворметиленовой сини перед употреблением разводят дистиллированной водой 1:10 и окрашивают мазки 30 с, затем промывают водой и дифференцируют в течении нескольких секунд 5 - 10%-ным раствором танина. Эритроциты окрашивают в красновато-фиолетовый цвет, плазма простейших кровепаразитов - в ярко-голубой, ядра лейкоцитов - в фиолетовый.

 

Для изучения морфологии паразитических инфузорий их окрашивают железным гематоксилином по Гейденгайну, а также гематоксицилином Делафильда или квасцовыми кармином.

 

Паразитических жгутинконосцев окрашивают железным гематоксилином или по Романовскому - Гимзе.

 

Слизистых споров окрашивают 1%-ным водным раствором метиленового синего 30 - 60 мин, затем препарат промывают в воде, последовательно проводят через спирты возрастающей крепости (70, 80, 96%-ный и абсолютный) и просветляют ксилолом.

 

Трематод и цестод окрашивают квасцовым кармином. Фиксированные в спирте препараты промывают в течении нескольких часов в проточной или часто сменяемой воде и помещают в краску от одной минуты до нескольких часов (в зависимости от толщины гельминта). Продолжительность окраски можно контролировать микроскопией препаратов. Окрашенные препараты переносят в дистиллированную воду, где в течении нескольких минут их тщательно отмывают от краски. Отмытых паразитов осторожно сушат фильтрованной бумагой и проводят через спирты возврастающей крепости (70, 80, 96%-ным), выдерживая в них несколько часов. Обезвоженных паразитов просветляют маслом и ксилолом.

 

Мелких цестод мождно окрашивать молочнокислым кармином по Блажину. Молочную кислоту разводят в 2 раза дистиллированной водой, добавляют небольшое количество кармина (в зависимости от желаемой степени окраски). Жидкость кипятят. Красить лучше свежие, нефиксированные объекты. Продолжительность окраски контролируют под микроскопом, а в случае перекрашивания объект переносят в цельную молочную кислоту для обесцвечивания. Окрашенный препарат промывают 20-60 мин водопроводной водой и помещают в бальзам.

 

При окраске крупных цестод этот способ модифицировали. Цестод промывают в проточной или часто сменяемой водопроводной воде при комнатной температуре летом один день, в холодное время года - 3-4 дня. Затем их помещают на 4-6 ч в краску (0,3 г кармина на 100 мл 30 %-ной молочной кислоты). Интенсивность прокрашивания контролируют под микроскопом. После этого на сутки их переносят в дистиллированную воду, в которую добавляют 3 капли раствора сернокислого железа и 2 капли 1%-ного раствора фенола. Далее цестод переносят на чистое предметное стекло, расправляют и высушивают при температуре 30-37°. Высохший очень плотно приставший к стеклу препарат заливают канадским бальзамом или канифолью, растворенной в смеси, состоящей из равных частей хлороформа и абсолютного спирта.

 

Для приготовления временных препаратов нематод не окрашивают, а кладут для просветления в неразведенную молочную кислоту или лактофенольный раствор (2 части глицерина, 1 часть молочной кислоты, 1 часть фенола и 1 часть воды) на 3-10 дней. Мелких гельминтов на 1-2 дня помещают в молочную кислоту (1-2 капли) и накрывают покровным стеклом.

 

Постоянные препараты для микроскопического исследования нематод готовят так. Фиксированных в 70 %-ном спирте живых гельминтов через сутки помещают на несколько часов (в зависимости от величины нематод) в 96 %-ный, а затем в абсолютный спирт на 3-5 мин. После этого их переносят в гвоздичное или хеноподиевое масло или карбоксилол на 2-5 мин, а затем кладут на чистое предметное стекло и заливают бальзамом.

 

Скребней (акантоцефалов) для изучения хоботка и крючков просветляют. Для этого их из 70 %-ного спирта переносят сначала в 50 %-ный глицерин, а затем в чистый. Структуру других органов изучают после полного обезвоживания гельминтов путем постепенного проведения их через спирты возрастающей крепости. Из абсолютного спирта гельминтов переносят на предметное стекло в каплю кедрового масла, покрывают покровным стеклом и микроскопируют.

 

Паразитических рачков исследуют в той же жидкости, в которой хранят. Красить их не обязательно. Иногда прибегают к окраске борным кармином, эозином, сафранином и др.

 

Идентификацию паразитов проводят по "Определителю паразитов пресноводных рыб СССР" (Изд-во АН СССР, 1984-1985 гг., т. 1-3).

 

Таблица I. Колонии бактерий, положительно реагируют на цитохромоксидазу (окрашены в сине - голубой цвет) (А); Б - определение чувствительности бактерий к антибиотикам методом бумажных дисков на агаре
Таблица I. Колонии бактерий, положительно реагируют на цитохромоксидазу (окрашены в сине - голубой цвет) (А); Б - определение чувствительности бактерий к антибиотикам методом бумажных дисков на агаре

 

Таблица II. Кровь карпа в норме: 1 - гемоцитобласт; 2 - миелобласт; 3- промислоцит; 4 - нейтрофильный миелоцит: 5 - нейтрофильный, 6, 7 - базофильные и 8 - псевдозоэозинофильный метамиелоциты; 9, 10 - налочкоядерный и сегментноядерный нейтрофилы; 11 - моноцит; 12 - 15 - лимфоциты; 16 - 21 - эритроциты
Таблица II. Кровь карпа в норме: 1 - гемоцитобласт; 2 - миелобласт; 3- промислоцит; 4 - нейтрофильный миелоцит: 5 - нейтрофильный, 6, 7 - базофильные и 8 - псевдозоэозинофильный метамиелоциты; 9, 10 - налочкоядерный и сегментноядерный нейтрофилы; 11 - моноцит; 12 - 15 - лимфоциты; 16 - 21 - эритроциты

 

Таблица III. Вирусная геморрагическая септицемия форели (по Гиттино): 1 - анемия и кровоизлияния в жабрах; 2 - геморрагии в мышцах и висцеральной жировой ткани; 3 - множественные геморрагии в мускулатуре, плавательном пузыре
Таблица III. Вирусная геморрагическая септицемия форели (по Гиттино): 1 - анемия и кровоизлияния в жабрах; 2 - геморрагии в мышцах и висцеральной жировой ткани; 3 - множественные геморрагии в мускулатуре, плавательном пузыре

 

Таблица IV. Аэромоноз (краснуха) карпов: 1,2- асцитная форма; 3 - язвенная форма
Таблица IV. Аэромоноз (краснуха) карпов: 1,2- асцитная форма; 3 - язвенная форма

 

Таблица V. Гиродактилез и дактилогироз рыб (А): 1 - паразиты на жабрах; 2 - гидродактилюс; 3 - дактилогирус; Б - возбудители протозоиных болезней рыб: 1 - триходина; 2 - хилодонелла; 3 - ихтиофтириус
Таблица V. Гиродактилез и дактилогироз рыб (А): 1 - паразиты на жабрах; 2 - гидродактилюс; 3 - дактилогирус; Б - возбудители протозоиных болезней рыб: 1 - триходина; 2 - хилодонелла; 3 - ихтиофтириус

 

Таблица VI. Возбудители гельминтозов рыб: 1 - ботриоцефалюс: 2 - кавиа: 3 карп со зрелыми филометроидесами
Таблица VI. Возбудители гельминтозов рыб: 1 - ботриоцефалюс: 2 - кавиа: 3 карп со зрелыми филометроидесами

 

Таблица VII. Возбудители крустацеозов рыб: 1 - аргулюс: 2 - лернеа; 3 - пораженная рыба
Таблица VII. Возбудители крустацеозов рыб: 1 - аргулюс: 2 - лернеа; 3 - пораженная рыба

Таблица VIII. Воспаление плавательного пузыря карпов (1); 2 - пузырь при остром и 3 - хроническом течении болезни
Таблица VIII. Воспаление плавательного пузыря карпов (1); 2 - пузырь при остром и 3 - хроническом течении болезни

Мы теперь в ВКонтакте присоединяйтесь!

Рыбное блюдо дня

  • Копчение лосося и ленка

    Блюда из лосося Aug 31, 2019 | 06:58 am

    Копчение лосося и ленка Копчение лосося и ленка Копченый лосось или ленок прекрасное блюдо как закуска или как ингредиент для бутербродов. Копченый лосось или ленок готовится крайне просто, но требует времени и наличия коптилки.

    Read more...
  • Хе из ленка

    Блюда из сибирской рыбы Aug 31, 2019 | 06:34 am

    Хе из ленка Хе из ленкаХе из ленка простое и незамысловатое, но очень вкусное блюдо, которые можно приготовить из свежепойманого ленка, очень просто за несколько часов в походных условиях.

    Read more...
  • Слабосоленый ленок

    Блюда из сибирской рыбы Aug 25, 2019 | 10:13 am

    Слабосоленый ленок Слабосоленый ленокИз свежепойманного ленка или хариуса можно сделать прекрасную свежесоленую рыбу, будь то дома или в походе на рыбалке. Слабосоленая рыба готовится очень просто и легко и не требует специальных навыков.

    Read more...
  • Сочная запеченная в духовке семга

    Семга рецепты Aug 25, 2019 | 06:52 am

    Сочная запеченная в духовке семга Сочная запеченная в духовке семга Сочная запеченная в духовке семга - прекрасное блюдо на обеденный стол для всей семьи, гости также по достоинству оценят ваше угощение. Готовится сочная запеченная в духовке семга быстро, всего за 40-45 минут и готовится очень[…]

    Read more...
  • Жареные стейки горбуши нежные и сочные на вкус

    Блюда из лосося Aug 25, 2019 | 06:36 am

    Жареные стейки горбуши нежные и сочные на вкус Жареные стейки горбуши нежные и сочные на вкусЖареные стейки горбуши нежные и сочные на вкус прекрасные блюда которые можно приготовить легко и очень быстро всего за 40 45 минут. Это блюдо прекрасно подойдет на праздничный стол при хорошей сервировке или[…]

    Read more...
  • Уха из семги по домашнему

    Семга рецепты Apr 15, 2019 | 06:27 am

    Уха из семги по домашнему Уха из семги по домашнемуУха из семги по домашнему отличное блюдо для всей семьи. Уха из семги по домашнему готовится за полтора часа, сложность приготовления блюда среднее.

    Read more...

Помощь сайту литературой

Showcases

Background Image

Header Color

:

Content Color

: