Постановка биологической пробы
Для установления окончательного диагноза на инфекционную болезнь в ряде случаев, а также при решении вопроса о снятии карантина или карантинных ограничений с хозяйства при аэромонозе (краснухе), фурункулезе и др. ставят биологическую пробу. При постановке ее с целью определения патогенности возбудителей используют чистые культуры бактерий, вирусов, грибов. Кроме того, применяют нативные суспензии и взвеси, приготовленные из различных органов и тканей естественно больных или подозреваемых в заражении рыб.
Биопробы ставят в аквариумах, ваннах или бассейнах, создавая в них оптимальные условия для жизни рыб и размножения возбудителей по основным гидрохимическим показателям. Наблюдения ведут ежедневно, учитывают число погибших рыб, клинические признаки болезни и характер патолого-анатомических изменений. Длительность опытов устанавливают с учетом инкубационного периода и длительности течения заболевания в естественных условиях. В опыты отбирают рыб наиболее восприимчивого к данному заболеванию вида и возраста из благополучного хозяйства. В каждой серии для заражения и контроля берут не менее 10 рыб.
При вирусных болезнях в качестве инфекционного материала берут свежеприготовленную вируссодержащую суспензию культуры клеток или безбактериальные фильтраты суспензий патологического материала (органов больных рыб). Количество вируссодержащего материала и способ заражения подбирают индивидуально для каждого заболевания. Наиболее часто материал вводят внутрибрюшинно, контактным методом, орошением жабр или выдерживанием рыб в воде, содержащей вирус. Параллельно ставят контрольные опыты.
Для подтверждения бактериальной природы болезни испытывают чистые культуры, выделенные при бактериологическом исследовании. Здоровых рыб заражают 2-суточными бульонными культурами внутрибрюшинно или внутримышечно в дозах 0,1-0,2 мл. Очень молодые или старые культуры для биопробы не пригодны, так как они недостаточно проявляют свои вирулентные свойства. Музейные штаммы перед опытом пассируют через восприимчивых рыб.
При постановке биологической пробы для диагностики микозов используют нативный материал, в котором содержится возбудитель на всех стадиях развития, или выращивают патогенные грибы на специальных питательных средах до стадий, пригодных для заражения.
Дозу вводимого патологического материала в каждом конкретном случае определяют титрованием на восприимчивых рыбах.
Биологическая проба считается положительной, если не менее чем у 80 % зараженных рыб четко проявляется весь комплекс клинических признаков и патологоанатомических изменений болезни и погибает не менее 50 % больных рыб при полном сохранении их в контроле, а также при выделении от заболевших рыб исходных возбудителей. Сроки появления клинических признаков болезни и гибель рыб для каждой болезни различны.
По окончании опытов воду в аквариумах обеззараживают, создавая в ней 4%-ную концентрацию формалина или 10%-ную раствора хлорной извести. Через час воду спускают в канализационную сеть, а рыб сжигают. Весь инвентарь и посуду, бывшие в контакте с больной рыбой, дезинфицируют в 4%-ном растворе формалина в течение часа.
При завершении биологической пробы в бетонированных бассейнах, земляных садках, карантинных прудах проводят дезинфекцию воды хлорированием, доводя содержание свободного хлора в воде до 4-5 мг/л. Через 24 ч воду пропускают через известковый фильтр (используя только свежую негашеную известь). После этого ложа прудов или садков и бассейны дезинфицируют негашеной известью (10 т/га) или хлорной известью (3 т/га) и оставляют без воды на один месяц.
В случае, если ставится вопрос о снятии карантина или других ограничений, биопробу проводят непосредственно в прудах хозяйства согласно инструкции по борьбе с соответствующим заболеванием.